酶联免疫吸附剂检测 ELISA
原理：利用抗体能够对应的抗原蛋白分子特异性结合，同时通过抗体上的酶连标记与底物反应显色或被激发而发光，最终间接完成抗原抗体复合物的定量检测分析。总结起来就是①抗原抗体特异性结合形成复合物，②抗体抗体复合物的标记。
三个步骤：① 待测蛋白被捕获或固定在微孔板上；② 用目标特异性检测蛋白检测分析物；③ 酶反应，即共轭酶将其底物转化为有色产物。根据不同的捕获和检测方法可分为四种类型：直接法、间接法、夹心法，竞争法。
1、直接法：首先将待测抗原固定在微孔板孔内，然后加入酶标的一抗与抗原结合，最后加入底物进行显色反应并检测吸光度，由于吸光度的大小和抗原抗体复合物的数量成线性关系，故可根据所测吸光度的值计算抗原的含量。优点：操作简单，不存在抗原与二抗存在交叉反应的错误结果。缺点：抗体制备难，检测信号无法放大。
2、间接法：和直接法的区别在于用两种抗体代替一种抗体。待测抗原固定在微孔板内，结合抗原的抗体不带酶标记物，当抗原抗体结合后，加入带酶标的二抗和一抗结合，加入底物进行显色反应。优点：二抗制备简单，选择面广，酶标种类多；一抗无需结合酶标保证了免疫结合活性；检测灵敏度高。缺点：存在潜在的二抗与抗原结合的风险，造成信号错乱；操作步骤多，反应时间久。
3、夹心法：在间接法的基础上改进，在微孔板的下方预先包被一种捕获抗体用于结合抗原，在此复合物基础上再与一抗结合，然后与二抗结合并检测。优点：二抗制备简单，选择面广，酶标种类多；一抗无需结合酶标保证了免疫结合活性；检测灵敏度高。缺点：存在潜在的二抗与抗原结合的风险，造成信号错乱；操作步骤多，反应时间久。
4、竞争法：若待测抗原很小，无法同时结合捕获抗体和一抗的话就不适合用夹心法检测。此时可以在微孔板板内包被抗体，同时提供带标记的同种抗原，把待测抗原和标记抗原同时加入和抗体结合，两种抗原会竞争性和抗体结合，当检测到信号较高时，表明待测抗原含量越少。
ELISA与Western Blot的比较：WB测定胞内蛋白需要裂解细胞提取蛋白，ELISA测定分泌到细胞外的蛋白。
分泌蛋白：是指在细胞内合成，分泌到细胞外起作用的蛋白质，如消化酶、抗体、体液中的部分蛋白成分和部分激素等。分泌蛋白浓度较低，故需要更加特异性好、灵敏度高的技术检测其含量。
