为准确了解某种蛋白功能，除需对其蛋白结构进行分析外，通常还需清楚其亚细胞定位，以此判断其发挥功能的可能场所。就该问题而言，生物学中最常用的方法是给待研究的目的蛋白进行荧光标记，其中最常见的荧光标签为绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白（RFP）。
一、什么是融合表达？
通过基因构建，将两个独立蛋白的编码基因变成一个完整的阅读框，在表达过程中，宿主会将这两个基因当作一个融合基因，从而表达出一个完整的大蛋白。
OliC（启动子）和 TrpC（终止子）共同启动目的基因和GFP的融合表达和终止表达，利用GFP发光地位目的蛋白。
二、利用GFP融合蛋白法进行蛋白质亚细胞定位
- pC-NEO-N/CGFP载体-- 平板划线法培养大肠杆菌细胞 →大提质粒
- GFP+ 目的基因（N端GFP），目的基因+GFP（C端GFP）
- N端GFP的引物设计（46bp）--
F引物： 20bp载体序列+6bp酶切位点+目的基因的前20bp序列
R引物： 20bp载体序列+6bp酶切位点+目的基因的后20bp的反向互补序列 - C端GFP的引物设计（46bp）--
目的基因的编码区去除终止密码子后设计扩增引物，此后同N端GFP的引物设计 - 提取WT菌株的 RNA 并反转录成 cDNA，以WT 菌株的cDNA为模板进行PCR扩增，将扩增产物连接到 GFP基因起始密码子的前面，构建成目的蛋白与GFP 的融合表达载体
-
载体使用限制性内切酶 SacⅠ和 XbaⅠ双酶切（双酶切可减少未被切开的载体，降低假阳性）
GFP融合蛋白的构建.png
GFP分别连在Erg4A和Erg4B的C端以及Erg4C的N端.png
GFP载体图谱1.png
