1. Time-Dependent Transcriptional Heterogeneity of Neutrophils in the Infarcted Heart
作者取了MI后day 1, 3, 5天的心脏,使用流式分选了CD11b+细胞,进行了单细胞转录组+CITEseq。作者对其中的中性粒细胞进行了亚群细分,得到了6个亚群。其中day1主要是Neutro4群,day3时Neutro1群增加,day5时Neutro3群增加,每一群都有自己独特的转录模式和转录因子。
2. SiglecFhi Neutrophils Time-Dependently Populate the Infarcted Heart
和MI后Day1的中性粒相比,day3和day5的中性粒高表达Siglecf,尤其是Neutro1和Neutro3群(这两群在day1时很少)。对day1和day3 SiglecF的流式检测(b-d)和免疫荧光染色(e)得到了一致的结果。此外,作者检测了SiglecFhi 和 SiglecFlow中性粒细胞的功能。结果显示MI后3天,SiglecFhi的吞噬功能更强(f),ROS的产生也更强(g)。day1时吞噬和ROS产生都差不多。
而在day5时,中性粒总数显著下降,但SiglecFhi中性粒依然占了一半左右(附件流式结果)。
3.Acquisition of SiglecF Parallels Acquisition of Aging and Activation Markers
同时,SiglecF的表达与中性粒细胞的aging/activation相一致。一些marker如Icam1, Itga4 (encoding CD49d), Cxcr4, Cxcr2 在SiglecFhi中性粒更高,而naive marker 如Sell,在SiglecFlow中性粒更高。
主要还是根据aging marker看的成熟度,感觉分化轨迹可能更客观一点。
4. The SiglecFhi Neutrophil State Is Acquired via a local tissue specification process
为了探究SiglecFhi中性粒的起源,作者对MI后day 1, day 3和对应con的外周血也进行了检测。外周血中性粒是Ly6G+CD115−(a)。对心脏和血液数据的整合提示血中存在3个主要细胞群:young neutrophils (Blood Young cluster: CD62Lhi, low Cxcr4), old blood neutrophils (Blood Old cluster: CD62Llow, high Cxcr4), type I IFN (interferon) response neutrophils (Neu-IFN)。
其中SiglecFneg和SiglecF+中性粒是心脏特有。SiglecFneg主要存在于MI后1天心脏,而SiglecF+中性粒主要存在于MI后3天心脏。
5. Relation of Heart-Infiltrating Neutrophils to Blood, BM, and Spleen Neutrophils
作者整合了心脏和外周血的数据,进行了拟时序分析。