视频:https://www.youtube.com/watch?v=FvHRio1yyhQ
sanger测序
sanger是第一代测序,它是使用的链终止法。下面我来说说我的理解。 当你拿到你需要测定的测序后(一般sanger测序为几百bp),
- 首先,加热变性使双螺旋解螺旋,然后将引物结合到一条链上,如图:
- 将结合了引物的序列等量放入4个反应体系中,然后将dna聚合酶和dNTPs加入各个反应体系中;
- 下一步,也是最关键的一步,在四个不同的反应体系中分别加入A,T,C,G四种带荧光标记的3'端被去OH的ddNTP,将体系混合(用来终止各个反应)
- 将反应结束的四个体系进行电泳(这种电泳的精度很高,可以精确到1个bp),然后就可以根据结果来进行来确定dna序列的碱基序列(越轻的dna片段跑得越快,所以从下往上读)
参考:https://zhuanlan.zhihu.com/p/51763314