背景介绍
转录组:特定类型细胞中全体转录本的集合(细胞特定时刻基因表达谱的快照)例如:mRNA、lncRNA、miRNA
技术
qRT-PCR:可以定量检测转录本拷贝数(表达水平),被广泛用于金标准,但是通量低,且需要事先知道待测转录本的序列
Microarray(微阵列/基因芯片):定量检测转录本,通量较高,但仍需知道待测转录本的序列
Expressed sequence tag(EST/表达序列标签):不需要事先知道待测转录本序列,可用来发现新的转录本,中通量
深度测序技术:在全转录组水平进行定量定性分析,也就是所谓的RNA-Seq技术
测序深度(Sequencing Depth):测序得到的碱基总量(bp)与基因组大小(Genome)的比值,它是评价测序量的指标之一。测序深度与基因组覆盖度之间是一个正相关的关系,测序带来的错误率或假阳性结果会随着测序深度的提升而下降。
RPKM是Reads Per Kilobase per Million mapped reads的缩写,代表每百万reads中来自于某基因每千碱基长度的reads数。RPKM是将map到基因的read数除以map到基因组上的所有read数(以million为单位)与RNA的长度(以KB为单位)。可以减少测序深度和序列长度对定量分析的影响。