一、载体被誉为基因操作中的“分子的运输车”,其本质是一类核酸分子
携带外源目的基因进入宿主细胞,并能稳定存在,利用宿主细胞的复制或表达系统,进行复制和表达系统的工具称为载体。
二、作为分子的运输者—载体需要具备以下几个基本条件:
- 具有自我复制的能力—载体必须要有自己的复制起始位点,能够独立复制;
- 具有合适的限制性核酸内切酶的单一酶切位点—外源DNA片段准确的插入到载体上;
- 具有合适的选择标记基因—用来筛选重组体;
选择性标记基因的作用:首先证明载体已经进入至宿主细胞;此外还可将含有外源基因的宿主细胞从其他细胞中筛选出来;
最常用的遗传选择性标记基因:
✔ 抗药性基因如抗氨苄青霉素、抗卡那霉素kana等抗抗生素基因
✔ lacZ基因
✔ 绿色荧光蛋白基因GFP
✔ 发光基因
三、依据用途和功能可分为:
克隆载体和表达载体
A.克隆载体(克隆基因或DNA片段):
克隆载体携带外源基因进入宿主细胞,使外源基因在宿主细胞中繁殖的载体。
复制子是克隆载体最重要的一个结构成分,复制子的存在带动外源基因在宿主细胞中复制扩增。
B.表达载体(用于基因的蛋白表达):
表达载体是能使外源基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。
与克隆载体想比较,表达载体不仅可以使外源基因在宿主细胞中扩增,而且还可利用表达系统完成在宿主细胞中的表达。