Classical pathway haemolytic assays
Classical pathway
Protocol
- 将绵羊红细胞离心（100xg, 5min），使用DGVB2+ Buffer将洗绵羊红细胞三次。
- 使用DGVB2+ Buffer将绵羊红细胞重悬至109 cells/ml。
- 将重悬的绵羊红细胞以体积比1：1的方式与溶血素（1：3000稀释在DGVB2+ Buffer中）在37℃混合孵育20min（缓慢摇晃）。
- 使用DGVB2+ Buffer将绵羊红细胞洗两次。
- 使用DGVB2+ Buffer将绵羊红细胞重悬至8x107 cells/ml。
- 在绵羊红细胞中加入人类血清至0.125%人类血清浓度，在37℃混合孵育1h。
- 用分光光度法测定血红蛋白释放量(405 nm)，此则为溶血量。
材料
Veronal buffer(pH 7.3):
0.15mM CaCl2
141mM NaCl
0.5mM MgCl2
1.8mM Barbitone sodium
3.1mM Barbituric acidDGVB2+ Buffer:
2.5 mM Veronal buffer (pH 7.3)
70 mM NaCl
140 mM glucose
0.1% gelatin
1 mM MgCl2
0.15 mM CaCl2绵羊红细胞
溶血素
人类血清
