热启动Taq酶的常见问题看这篇就够了!

        关于热启动Taq酶,大家还有很多想要了解的方面,小编搜集了一些同学的问题,相信这些答案能帮助很多科研小伙伴更加了解热启动Taq酶哦~


图1.  Taq DNA聚合酶的三维结构

问题一:我的样本是肿瘤细胞,可以试试热启动Taq酶吗?

        可以。诸如来源于肿瘤、土壤、粪便、血液等困难DNA片段的扩增对Taq酶的特异性要求很高。若使用普通Taq酶进行PCR反应很容易导致假阳性结果,因为Taq酶的最适温度为72℃,此时活性最佳,低于这个温度时,仍会有较低的活性,极易错配或形成引物二聚体,尤其是当设计的引物3’端是G或C,错配的链很难重新解开。而经过了化学修饰、配体法修饰或抗体法修饰的热启动Taq酶可以避免在加样、升温等阶段容易出现的非特异扩增和引物二聚体产生,大幅提升了反应的特异性。像一些国外品牌ABI、Takara,国内的Starvio等等,都具有特异性不错的热启动Taq酶产品。就本实验室经验来谈,与经过抗体封闭的热启动Taq酶相比,StarvioHC热启动酶的活性封闭更为彻底,反应特异性也更高,配套的反应缓冲液经多次优化,能有效抵御复杂样本种杂质的干扰,特别适合从复杂的DNA样本中(肿瘤组织、血液等)扩增低拷贝基因。

问题二:我要做qPCR,但是目标基因丰度很低,可以使用热启动Taq酶吗?

        当然可以!低丰度的靶分子往往被其他DNA分子所淹没,从而影响PCR反应的效率和产量。热启动Taq酶可以提高PCR反应的特异性和灵敏性,从而可以输出更多的目的片段。市面上不乏高灵敏度的热启动Taq酶产品,不用考虑经费问题,可以选择Thermo

        Fisher Scientific的Dream Taq热启动DNA聚合酶,可扩增低至3pg的人基因组DNA;但想要性价比高,并且灵敏度更高的可使用Starvio热启动酶,据实验数据,每反应体积能够检测的最低量可达2pg人基因组DNA。

问题三:我想检测泌尿生殖道支原体、衣原体感染,需要进行多重PCR,有好用的热启动Taq酶推荐吗?

        有的。可以支持多重PCR的热启动Taq酶对酶动力要求很高,这个根据您的实验经费来,充足的话可以看看英国Bioline公司的热启动Taq酶(lmmulase)酶动力较好,可做4重PCR,等量起始模板CT30时的荧光信号值最高。目前国内能够支持多重PCR的热启动Taq酶并不多,我们实验室曾经使用Starvio热启动酶检测过泌尿生殖道支原体、衣原体感染,如图所示,扩增曲线典型,酶动力强劲,很适合于多重基因检测。值得一提的是,Starvio热启动酶支持四重以内的PCR检测哦,而且性价比很高,不妨一试!


图2. 使用Starvio热启动酶检测泌尿生殖道支原体、衣原体感染。1为支原体扩增曲线,2为衣原体扩增曲线,3为内参基因扩增。可见,Starvio热启动酶具有灵敏度高,扩增曲线好,酶动力强等优点,很适合于多重基因检测。

问题四:在使用Starvio热启动Taq酶进行PCR反应时,需要注意什么?

        问出这个问题的同学已经是个具备科研素养的科研人了哦~实验的成功除了依靠性能优异的试剂外,还需要各方面因素的加持。我们在使用Starvio热启动Taq酶时,一定要注意以下几点,这样才能获得满意的结果!

1.热启动—热启动Taq酶需要在高温下启动其活性。PCR反应开始前,应将反应混合物95℃加热5分钟。

2.适当混合—反应液体量越少,混合越敏感。应选择适当的管道或反应器,并进行充分混合。

3.模板用量—模板DNA的量并非越多越好,应根据其来源、浓度、纯度、目标片段的丰度等进行调试。

4.热启动Taq酶和引物—实验中引物的设计也非常重要,直接关系结果的好坏,要选择有良好扩增性能的组合,以保证PCR反应的稳定和高效。

最后编辑于
©著作权归作者所有,转载或内容合作请联系作者
  • 序言:七十年代末,一起剥皮案震惊了整个滨河市,随后出现的几起案子,更是在滨河造成了极大的恐慌,老刑警刘岩,带你破解...
    沈念sama阅读 218,386评论 6 506
  • 序言:滨河连续发生了三起死亡事件,死亡现场离奇诡异,居然都是意外死亡,警方通过查阅死者的电脑和手机,发现死者居然都...
    沈念sama阅读 93,142评论 3 394
  • 文/潘晓璐 我一进店门,熙熙楼的掌柜王于贵愁眉苦脸地迎上来,“玉大人,你说我怎么就摊上这事。” “怎么了?”我有些...
    开封第一讲书人阅读 164,704评论 0 353
  • 文/不坏的土叔 我叫张陵,是天一观的道长。 经常有香客问我,道长,这世上最难降的妖魔是什么? 我笑而不...
    开封第一讲书人阅读 58,702评论 1 294
  • 正文 为了忘掉前任,我火速办了婚礼,结果婚礼上,老公的妹妹穿的比我还像新娘。我一直安慰自己,他们只是感情好,可当我...
    茶点故事阅读 67,716评论 6 392
  • 文/花漫 我一把揭开白布。 她就那样静静地躺着,像睡着了一般。 火红的嫁衣衬着肌肤如雪。 梳的纹丝不乱的头发上,一...
    开封第一讲书人阅读 51,573评论 1 305
  • 那天,我揣着相机与录音,去河边找鬼。 笑死,一个胖子当着我的面吹牛,可吹牛的内容都是我干的。 我是一名探鬼主播,决...
    沈念sama阅读 40,314评论 3 418
  • 文/苍兰香墨 我猛地睁开眼,长吁一口气:“原来是场噩梦啊……” “哼!你这毒妇竟也来了?” 一声冷哼从身侧响起,我...
    开封第一讲书人阅读 39,230评论 0 276
  • 序言:老挝万荣一对情侣失踪,失踪者是张志新(化名)和其女友刘颖,没想到半个月后,有当地人在树林里发现了一具尸体,经...
    沈念sama阅读 45,680评论 1 314
  • 正文 独居荒郊野岭守林人离奇死亡,尸身上长有42处带血的脓包…… 初始之章·张勋 以下内容为张勋视角 年9月15日...
    茶点故事阅读 37,873评论 3 336
  • 正文 我和宋清朗相恋三年,在试婚纱的时候发现自己被绿了。 大学时的朋友给我发了我未婚夫和他白月光在一起吃饭的照片。...
    茶点故事阅读 39,991评论 1 348
  • 序言:一个原本活蹦乱跳的男人离奇死亡,死状恐怖,灵堂内的尸体忽然破棺而出,到底是诈尸还是另有隐情,我是刑警宁泽,带...
    沈念sama阅读 35,706评论 5 346
  • 正文 年R本政府宣布,位于F岛的核电站,受9级特大地震影响,放射性物质发生泄漏。R本人自食恶果不足惜,却给世界环境...
    茶点故事阅读 41,329评论 3 330
  • 文/蒙蒙 一、第九天 我趴在偏房一处隐蔽的房顶上张望。 院中可真热闹,春花似锦、人声如沸。这庄子的主人今日做“春日...
    开封第一讲书人阅读 31,910评论 0 22
  • 文/苍兰香墨 我抬头看了看天上的太阳。三九已至,却和暖如春,着一层夹袄步出监牢的瞬间,已是汗流浃背。 一阵脚步声响...
    开封第一讲书人阅读 33,038评论 1 270
  • 我被黑心中介骗来泰国打工, 没想到刚下飞机就差点儿被人妖公主榨干…… 1. 我叫王不留,地道东北人。 一个月前我还...
    沈念sama阅读 48,158评论 3 370
  • 正文 我出身青楼,却偏偏与公主长得像,于是被迫代替她去往敌国和亲。 传闻我的和亲对象是个残疾皇子,可洞房花烛夜当晚...
    茶点故事阅读 44,941评论 2 355

推荐阅读更多精彩内容