二抗是相对于一抗的概念,二抗也叫抗抗体。二抗的主要作用是跟一抗结合,起到放大一抗信号,达到检测目的。二抗相对于一抗具有“通用性”,一抗是一对一(Fab区域结合抗原表位),二抗是一对多(Fab区域结合一抗的Fc区域)。只要是同一物种来源的一抗,都可以用针对此物种的二抗进行检测。
(1)二抗的生产
将一抗来源物种的免疫球蛋白(Ig)的Fc区域去免疫动物。获得针对此物种的二抗。
Q: 二抗来源为什么一般是山羊,绵羊,驴?
首先,二抗的宿主来源跟一抗的宿主来源不是同一物种。
其次,二抗使用量大,所需血清量也较大,选取免疫动物时,对应选择个体大且血量多的宿主动物。如:马、牛、羊、猪等。
(2)二抗的标记
常见的标记物有:
1. 酶类:辣根过氧化物酶(HRP) 和 碱性磷酸酶(AP或其衍生物APAAP,PAP)
2. 荧光素:Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 488、Alexa 546、FITC、TRITC、RB200、Texas red、Cy3等
3. 胶体金:免疫电镜
4. 放射性同位素:32P、131I
5. 化合物:生物素、地高辛
根据标记物的不同,有对应不同的检测方式和仪器设备。