及时止损需要细心，时时观察和记录，尤其在做了不规范的操作，看到了不符合预期的现象时，必须详细记录，把现象解释清楚了再进行下一步操作，不然做多错多。
比如6月底开始做crispr筛选，有两个地方出现了不规范操作和不符合预期现象：（1）测病毒滴度：paper上是离心转染，24孔板转染细胞量非常大，为2*10^6个/孔。我转染时没有离心，转染后换上清时，大量的细胞没有贴壁而丢失，实验结果就不准确，重复结果一致性差。下一步实验只能在不准确的数据基础上进行（2）paper说计算抗生素致死剂量时要取最低浓度，不然可能会杀死被转入了多个质粒的细胞，而且在做最低杀伤曲线时，铺板的细胞量非常少，约为10%铺板密度。转染后，细胞密度接近90%，我用最低浓度，培养上清15ml，开始药筛3天后观察细胞并没有太多悬浮细胞，药筛持续了6天，没有出现预期现象，培养皿里的细胞几乎没减少，但是对照组的细胞被杀死完了，我也不清楚到底是否转染成功了，没有收获一些细胞用pcr或者加大抗生素浓度进一步验证，而是继续进行了下一步实验，到了今天收获的细胞dna扩增不出来sgRNA片段，不排除是当时没有转染成功。
方法：每日记录实验流水账，各种细节；每日反省今日的不符合规范的操作和不符合预期的现象；每周进行工作总结，回顾计划目的，调整实施方法和方向。
持续的饱有能量的工作状态的方法：偶尔打鸡血很容易，但是持续的、专注的、时时充满能量的去做一件事情非常困难，这是一件反人性的事情，人性就是懒惰、随时转移注意力、好奇、喜新厌旧。就比如人们总是对商店新品充满了好奇和兴趣。工作状态受到心理和生理两方面的影响，要想在生理和心理两方面都达到充沛积极的状态，必要靠意志力约束自己进行生理上和心理上的练习，这是反人性的，所以也是很困难的，绝大多数人做不到，做到了也就超出了绝大多数人。deadline就是生产力，人在轻松自在无目标约束的情况下生产力是极其低下的，尤其是长期工作，很容易忘记初心，这也是人性，所以必须时时反省，反省自己开始一项任务时的原因、预期结果是什么。
方法：
生理、心理练习包括早晨八段锦、呼吸练习、冥想；晚上瑜伽、呼吸练习、冥想，每日坚持不辍，除非在禁食日，重感冒日可以停一次，其余时间都必须练习。修习不净观，戒除对于电子产品、各种娱乐的贪恋，无事可做就发呆，练习静默。
不忘初心：在开始一项计划之前，一定要详细记录开始计划的初衷、可行性、可能的困难，预期产出。
