提取的总RNA跑胶为什么只有3条带

三条是主带

哺乳动物的RNA包括mRNA,rRNA,tRNA和小RNA,根据分子量和沉降系数的不同,rRNA又可分为28s, 18s 和5s 的rRNA。从RNA的含量上看,rRNA是几种RNA中最多的,高达90%以上,而mRNA很少,只有1-2%,而其他两种RNA的分子量比较小,这就解释了为什么从凝胶电泳的结果上只能看到三条带。而这三条带的完整性,就代表了mRNA的完整性,也就是说如果我们观察到这三条带是清新完整,就说明我们提取到的RNA质量比较好,反之,如果观察到这三条带成弥散状,就说明我们提取到的RNA比较不好。

核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)是组成核糖体的主要成分。核糖体是合成蛋白质的工厂。在大肠杆菌中,rRNA量占细胞总RNA量的75%-85%,而tRNA占15%,mRNA仅占3-5%。

rRNA一般与核糖体蛋白质结合在一起,形成核糖体(ribosome),如果把rRNA从核糖体上除掉,核糖体的结构就会发生塌陷。

原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。S为沉降系数(sedimentation coefficient),当用超速离心测定一个粒子的沉淀速度时,此速度与粒子的大小直径成比例。5S含有120个核苷酸,16S含有1540个核苷酸,而23S含有2900个核苷酸。而真核生物有4种rRNA,它们分子大小分别是5S、5.8S、18S和28S,分别具有大约120、160、 1900和4700个核苷酸。

RNA样品电泳后,可见28S、18S及5S小分子RNA条带,则说明完整性好。若有降解可能是操作不当或污染了RNase.。28S和18S RNA比值约为2:1,表明RNA无降解。如比值逆转,则表明RNA降解。

应该从下到上:5s、18s、28s、

120、1900、4700bp、

提取的总RNA跑胶从大到小有带3条,

5S,18S,28S。 5S应该最暗,28S应该最亮。和DNA Marker比较的话,28S大概在5K左右,18S大概在3K左右,5.8S和5S是用琼脂糖是分开不了的,只是一条很弱的条带,在100BP左右,好的RNA要求28S亮度是18S的两倍。

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