200902
pcr扩增不出来目的片段,调整:降低样品浓度,增加样品溶解度,降低样品input量
不规范操作:摸索条件时同时改动多个参数,没有阳性对照和阴性对照
教训:摸索条件时,每次只改一个参数,其余参数保持完全一致;好的阳性对照和阴性对照才能得出准确的结果
200903
pcr反应,input 10ug无法扩出目的条带,稀释后input500ng可以扩出目的条带,找原因
不规范操作:在摸条件的时候,不要用正式样品,更不要自己觉得这次肯定出结果就all in!!!
不符合预期现象:用试剂盒回收基因组DNA,input 100+ug,output 30ug。(1)试剂盒的滤柱回收上限为30~40ug;(2)样品加入酒精后出现沉淀,全部加到了一个滤柱内;(3)没有加前面步骤的buffer,可能影响滤膜的活化吸附力
不符合规范的操作:扩增文库时,pcr cycyles过高,会导致不同扩增难度的产物出现bias,所以要增加引物多样性,降低cycles
200908
不规范操作:出问题时,不要all in,要暂停实验,复盘整个实验的体系操作细节,然后网上查找原因,并请求高年级师兄姐的帮助。针对可能的问题,制定相应的解决方案。